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为生物制药而生的超高效液相色谱系统

编辑:金沙官网www.cqstyq.com        发布日期:2018-08-06        点击量:896

Vanquish Flex UHPLC系统的设计极其灵活,可满足生物制药市场所有的必需应用和方法开发,以及其他领域的方法开发。它具有出色的时间保留稳定性、灵敏度和分离效率,可对生物治疗药物的蛋白质组分进行分析。同时,它也能与质谱仪、荧光检测系统以及电雾式检测器无缝集成,用途广泛。

2015年3月,SelectScience公布了2015年度科学家选择大奖(Scientists’Choice Awards)的名单。赛默飞世尔科技的Vanquish UHPLC系统被数千名科学家评为最佳分离新产品(Best New Separations Product)。如今,基于备受青睐的Vanquish UHPLC平台,赛默飞世尔再次推出“生物制药专用”的Vanquish Flex UHPLC系统。

近年来,超高效液相色谱(UHPLC)的开发促进了小分子的分离。与高效液相色谱(HPLC)相比,UHPLC带来了更佳的分离和更快的运行,在药物开发中发挥了重要作用。不过,随着蛋白质逐渐被开发为生物治疗药物,研究人员需要一种高效且灵活的手段来完整地表征这些大分子。

蛋白质往往比小分子大得多,无论经受什么样的压力或流速,它们的运动都受到扩散的限制。因此,它们的分离效果往往不如小分子那么好,大大缩短分析时间也是不可能的。同时,一些大蛋白(如抗体)产生的峰图只有细微的差异,让研究人员难以区分。例如,抗体上单个氨基酸的改变通常代表化学成分中的差异不足0.1%。随着蛋白质越来越大,事情也变得越来越棘手。

Vanquish Flex UHPLC系统的设计极其灵活,可满足生物制药市场所有的必需应用和方法开发,以及其他领域的方法开发。它具有出色的时间保留稳定性、灵敏度和分离效率,可对生物治疗药物的蛋白质组分进行分析。同时,它也能与质谱仪、荧光检测系统以及电雾式检测器无缝集成,用途广泛。

灵活应用

Vanquish Flex系统采用新型四元泵模块,在保证高通量的前提下依然可提供方法开发的灵活性。它通过SmartFlow?泵技术及样品自动预压缩功能,明显提高保留时间稳定性,显示尖锐峰形,延长色谱柱寿命。泵最大耐压1000 bar(相当于15,000 psi),流速高达8 mL/min,应用灵活,可实现高分辨分离。

此系统在检测聚集体、多糖、电荷异构体、肽图、完整蛋白质量等方向表现优异。研究人员可灵活选择不同的色谱模式,如反相色谱(PRC)、离子交换色谱(IEX)和体积排阻色谱(SEC)。尤其是IEX和SEC的流动相含有高浓度缓冲盐,Vanquish Flex UHPLC系统的全程生物兼容体系可以完全避免不锈钢系统的高盐不耐受,具有相当长的使用寿命。

可靠分离

为了成功捕获蛋白质中的微妙变化,仪器需要对存储和分离过程进行精确的温度控制,避免蛋白样品受到外部因素的影响。Vanquish Flex系统采用静态空气和循环空气的双恒温模式,确保柱温始终恒定的同时,为蛋白质的精确分离提供多种选择。系统的主动预加热功能,可避免来自温度效应的性能损耗,确保进入色谱柱内的溶剂与色谱柱温度匹配。

精确处理

Vanquish Flex系统具有无以伦比的进样精确度和通量能力,独特的智能预压缩技术通过避免压力下降,提高了重复性,并增加了色谱柱的使用寿命。创新的气流冷却方法可以最大程度地确保样品稳定性。分流进样器FT模块的单瓶容量可满足208次进样,开箱即用。如果选择Vanquish加载装置模块,可提升至8832样品容量(23孔板)。

多种检测

若想在分析中发现各种感兴趣的组分,选择适当的检测技术是至关重要的。Vanquish Flex系统提供多种检测选项,可确保您尽可能多地收集分离过程中的信息。利用Thermo Scientific?LightPipe?技术,可实现高度灵敏的线性二极管阵列检测;荧光检测可带来高选择性和高灵敏度的信号;电喷雾检测器可以在不标记的前提下对非显色物质进行近通用性响应。当然,Vanquish Flex系统也可以与包括Orbitrap在内的质谱系统无缝整合,带来出色的LC-MS。

现在,大家就来看看Vanquish Flex系统的一些应用吧。

聚集体

生物治疗药的聚集度对药物的疗效有很大的影响,因此监管机构通常对其聚集度有一定的限制。对于二聚体、三聚体及更高级结构的去除,典型的处理方式为体积排阻色潽法(SEC)。赛默飞推荐使用的SEC色谱柱是MAbPac SEC-1,该色谱柱采用球形全多孔超纯硅胶填料,粒径通常为5μm,多种柱长可选。即便在非变性条件下、使用高盐和低盐流动相以及挥发性淋洗液,Vanquish Flex UHPLC系统仍能提供高灵敏度、高分辨率SEC。

使用MAbPac SEC色谱柱实现对曲妥单抗单体和聚集体的基线分离

使用MAbPac SEC色谱柱实现对曲妥单抗单体和聚集体的基线分离。

聚糖

即使药物上的聚糖在糖型、组成或连接上发生非常微小的变化,也可能改变生物治疗药的疗效,这也意味着蛋白药物上的聚糖的正确表征是至关重要的。一种方便的检测方法是对聚糖进行荧光标记,然后通过荧光检测器进行检测。GlycanPac?色谱柱是混合模式的色谱柱,可利用电荷、异构体结构、分子大小的差异进行分离。Vanquish Flex系统配荧光检测器,可检测浓度极低的标记聚糖。若配有CAD检测器,则可以检测未标记的聚糖分子。

使用GlycanPac AXR-1色谱柱分离胎球蛋白中的含氮聚糖的6次进样叠加色谱图

使用GlycanPac AXR-1色谱柱分离胎球蛋白中的含氮聚糖的6次进样叠加色谱图。

电荷变异体

蛋白质电荷的均匀性对于蛋白药物的结构、稳定性、亲和力和疗效有着非常重要的影响。通常使用离子交换色谱法(IEX),通过盐梯度或pH梯度进行分离。对于常规的高通量离子交换色谱法,无论是一般梯度还是陡梯度,Vanquish Flex UHPLC系统都能提供快速、稳定、可靠的分析,并且样品容量是许多UHPLC系统的两倍。

单克隆抗体的pH梯度离子交换(六次运行叠加)色谱图。

单克隆抗体的pH梯度离子交换(六次运行叠加)色谱图。

完整蛋白质量

有时候,大家还需要完整地表征生物治疗药物蛋白质,尤其是当某些结构信息可能无法通过其他手段观察到(如异构现象)时。对于某些新型生物治疗药物种类(如抗体药物偶联物,ADCs),完整表征蛋白质也很重要。UHPLC是分离高级结构及干扰物质最有效的技术。Vanquish Flex可轻松连接包括Orbitrap在内的所有Thermo Scientific质谱仪,带来出色的分离重现性。

100 ng mAb利妥昔单抗的质谱分析

100 ng mAb利妥昔单抗的质谱分析。(A)使用了Thermo ScientificMSPac?DS-10除盐Cartridge的液相色谱图;(B)去卷积光谱图和带注释的糖链异质体。

作为一台为生物制药而生的UHPLC系统,Vanquish Flex的研发遵循质量源于设计的理念,尽力提高制药的稳定性和可靠性。在设计中采用最优质的材料,遵循最严格的生产标准,使其具有卓越的性能和保留时间稳定性

 


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